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ELISA常見問題解答

2024-04-18 [722]

 以下是ELISA實驗過程中遇到的問題解答,更多實驗資訊可咨詢我司業(yè)務員。天津睿創(chuàng)生物科技有限公司擁有自己的實驗室,備有專業(yè)的技術研發(fā)團隊,長期致力于各種生物試劑,細胞,血清,ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售,實驗提供免費代測服務,質量問題包退換,并提供技術服務,如果您有實驗上的問題歡迎前來咨詢,為您提供專業(yè)的一對一技術指導。


1、試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫,會有什么影響?


如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫(20~25℃),可能會導致溫育時間不夠,從而使OD值偏低。


2.、移液器吸液量不足或吸頭內壁不清潔,會造成什么后果?


移液器吸液量不足或吸頭內壁不清潔,都可能導致加樣量不足,造成OD值偏低。此外,吸頭內壁不清潔還可能導致非特異性吸附,進一步影響實驗結果。


3、操作順序顛倒或遺漏步驟,會有什么后果?


如果操作順序顛倒或遺漏步驟,很可能導致實驗失敗,例如漏加酶結合物、顯色劑等,使整塊ELISA板都不顯色。


4、溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求,會有什么影響?


溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求,都會影響反應的進行,導致OD值偏低。例如,保溫用的濕盒沒有預溫,或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等。


5、洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,會造成什么后果?


洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過高等,都可能導致洗去特異性結合物,使OD值偏低。


6、洗板時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗板次數(shù)過多,會有什么影響?


這些操作都可能導致洗去結合在包被板的特異性結合物,從而使OD值偏低。


7、加完終止液后沒有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進行讀數(shù),會有什么影響?


這可能導致檢測OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內進行讀數(shù)。


8、酶標儀檢測波長設定有誤,會有什么后果?


如果酶標儀檢測波長設定有誤,例如選用的波長不是產物的敏感吸收峰,可能會導致OD值偏低或偏高。


9、陰性對照出現(xiàn)陽性結果,可能的原因是什么?


陰性對照出現(xiàn)陽性結果可能是由于樣品、試劑被污染,或加樣時操作不當導致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染。此外,抗體量過多導致非特異性結合也可能是一個原因。


10、酶標板整體背景高,可能的原因是什么?


酶標板整體背景高可能是由于底物孵育過程沒有避光,導致背景信號增強。


11、復孔之間重復性差,可能的原因是什么?


復孔之間重復性差可能是由于加樣本及試劑量不準、孔間不一致等原因造成的。此外,操作條件、人員等的不一致也可能導致重復性差。


12、陽性對照值偏低或低吸光度,可能的原因是什么?


陽性對照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時間或溫度不夠、顯色反應時間太短、顯色液變質或試劑過期、試劑稀釋有誤等原因造成的。


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